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HEPENGBIO細(xì)胞AMPK激酶活性光度法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
HEPENGBIO細(xì)胞AMPK激酶活性光度法定量檢測試劑是一種旨在通過多肽底物受到AMPK磷酸化后，進(jìn)而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng)，測定產(chǎn)生ADP過程中，伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反應(yīng)， 即采用光度法測定其氧化后峰值的變化，以分析細(xì)胞裂解樣品中AMPK活性的方法。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品（動物、人體）、部分或完全純化酶樣品中AMPK激酶的定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，高度敏感。
技術(shù)背景
5’AMP活化蛋白激酶（5’AMP activated protein kinase；AMPK）屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶（serine/threonine protein kinase）家屬成員之一。其為從酵母到人體高度進(jìn)化保留的激酶復(fù)合物，由3個亞體，α、β、γ構(gòu)成：其中γ亞體有4個胱硫醚β合酶（cystathione beta synthase；CBS）結(jié)構(gòu)域，又稱為巴特曼（Bateman）結(jié)構(gòu)域，以探測AMP和ATP的比例；α亞體含有催化結(jié)構(gòu)域，一旦收到AMPKK或LKB1/MO25/STRAD 復(fù)合物催化的磷酸化后，AMPK被激活。所有亞體都有不同異構(gòu)體形式，包括α1、α2、β1、β2、γ1、γ2和γ3。其功能在于保持細(xì)胞能量內(nèi)環(huán)境恒定：促進(jìn)脂肪酸β氧化、抑制膽固醇合成、促進(jìn)肌肉葡萄糖吸收和調(diào)節(jié)胰島素分泌等。AMPK在肝臟、腦和肌肉組織中高度表達(dá)。其磷酸化目標(biāo)序列為 LKKLTRASFFGQ。基于底物L(fēng)KKLTRASFFGQ，在ATP的存在下，受到5’AMP活化蛋白激酶的磷酸化，獲得產(chǎn)物磷酸化多肽，進(jìn)而通過丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase；LDH）反應(yīng)系統(tǒng)中，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的變化（340nm），來定量分析5’AMP活化蛋白激酶的活性。其反應(yīng)方式為：
AMPK
LKKLTRASFFGQ + ATP → LKKLTRApSFFGQ + ADP
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate + ADP → pyruvate + ATP
lactate dehydrogenase
pyruvate + NADH → lactate + NAD+
（高吸收峰） （低吸收峰）
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主要用途
HEPENGBIO細(xì)胞AMPK激酶活性光度法定量檢測試劑是一種旨在通過多肽底物受到AMPK磷酸化后，進(jìn)而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng)，測定產(chǎn)生ADP過程中，伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反應(yīng)， 即采用光度法測定其氧化后峰值的變化，以分析細(xì)胞裂解樣品中AMPK活性的方法。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品（動物、人體）、部分或完全純化酶樣品中AMPK激酶的定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，高度敏感。
技術(shù)背景
5’AMP活化蛋白激酶（5’AMP activated protein kinase；AMPK）屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶（serine/threonine protein kinase）家屬成員之一。其為從酵母到人體高度進(jìn)化保留的激酶復(fù)合物，由3個亞體，α、β、γ構(gòu)成：其中γ亞體有4個胱硫醚β合酶（cystathione beta synthase；CBS）結(jié)構(gòu)域，又稱為巴特曼（Bateman）結(jié)構(gòu)域，以探測AMP和ATP的比例；α亞體含有催化結(jié)構(gòu)域，一旦收到AMPKK或LKB1/MO25/STRAD 復(fù)合物催化的磷酸化后，AMPK被激活。所有亞體都有不同異構(gòu)體形式，包括α1、α2、β1、β2、γ1、γ2和γ3。其功能在于保持細(xì)胞能量內(nèi)環(huán)境恒定：促進(jìn)脂肪酸β氧化、抑制膽固醇合成、促進(jìn)肌肉葡萄糖吸收和調(diào)節(jié)胰島素分泌等。AMPK在肝臟、腦和肌肉組織中高度表達(dá)。其磷酸化目標(biāo)序列為 LKKLTRASFFGQ。基于底物L(fēng)KKLTRASFFGQ，在ATP的存在下，受到5’AMP活化蛋白激酶的磷酸化，獲得產(chǎn)物磷酸化多肽，進(jìn)而通過丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase；LDH）反應(yīng)系統(tǒng)中，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的變化（340nm），來定量分析5’AMP活化蛋白激酶的活性。其反應(yīng)方式為：
AMPK
LKKLTRASFFGQ + ATP → LKKLTRApSFFGQ + ADP
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate + ADP → pyruvate + ATP
lactate dehydrogenase
pyruvate + NADH → lactate + NAD+
（高吸收峰） （低吸收峰）
