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主要用途
HEPENGBIO細胞沉默調節蛋白3 （SIRT3）活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過熒光探針氨甲基香豆素標記人工合成的乙酰化p53多肽底物，經過SIRT3脫乙酰基后，被位點特異性氨基肽酶水解，釋放釋放出具有強烈熒光的7-氨-4甲基香豆素，即采用熒光法來測定細胞裂解萃取樣品中酶活性的方法。其適用于各種細胞裂解萃取液樣品（動物、人體）、線粒體蛋白樣品、部分或完全純化酶樣品中SIRT3的活性定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。
技術背景
人體組蛋白脫乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家屬分成三類共20多個蛋白：種類I（class I）與酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于細胞核中；種類II（class II）與酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于細胞核和細胞漿里；上述兩大種類的蛋白分子催化結構域含有鋅，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。種類III（class III）為NAD+輔助因子必需，又稱為sirtuins，與酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，是進化保留的古老的酶類，存在于真核生物、古生菌（Archaea）和真細菌（Eubacteria）等，包括SIRT1至7等，為曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感型賴氨酸脫乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。催化賴氨酸脫乙酰基反應，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基團轉化產生的煙酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。其中可溶性SIRT3位于細胞線粒體內，體內熱量限制（caloric restriction）、寒冷刺激、細胞應激等因素，使成熟且活性Sirt3由細胞核轉移到線粒體，經基質加工肽酶（matrix-processing peptidase）激活，表達增加，作用于乙酰輔酶A合酶2（acetyl CoA synthetase 2）、UCP1、PGC-1α等天然目標底物，脫乙酰化和激活。其功能在于調節適應性生熱反應（thermogenesis）、確保能量產生、提供乙酸的代謝使用、調節基礎ATP水平、調節影響線粒體通透性的凋亡信號、調節表觀遺傳基因沉默，是代謝或氧化狀態的感應因子，生命延長（life extension）的標志。Sirt3異常，將導致神經退行性疾病、癌癥、衰老、代謝功能異常等疾病。基于人工合成的乙酰化p53多肽底物Ac- Gln-Pro -Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切離的功能，首先使用熒光染料氨甲基香豆素（aminomethylcoumarin；AMC）來標記乙酰化p53多肽底物，其次進行脫乙酰化，最后底物進一步在氨基肽酶的催化酶解，釋放出具有強烈熒光的7-氨-4甲基香豆素（7-amino-4-methylcoumarin；AMC）（激發波長350-360nm；散發波長450-465nm），由此來定量測定沉默調節蛋白3的活性。其反應系統為：
Sirt3
Ac-Gln-Pro-Lys-Lys（Ac）-AMC + NAD → Ac- Gln-Pro -Lys-Lys-AMC + nicotinamide + O-acetyl-ADP-ribose
氨基肽酶
Ac-Arg-His-Lys-Lys-AMC → Ac-Arg—His-Lys-Lys + AMC
本公司所有產品僅供實驗室科學研究使用，不得用于醫療診斷，食品，化妝品和其他用途。
產品信息價格說明書等相關資料，可以聯系客服咨詢索取。
HEPENGBIO細胞沉默調節蛋白3 （SIRT3）活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過熒光探針氨甲基香豆素標記人工合成的乙酰化p53多肽底物，經過SIRT3脫乙酰基后，被位點特異性氨基肽酶水解，釋放釋放出具有強烈熒光的7-氨-4甲基香豆素，即采用熒光法來測定細胞裂解萃取樣品中酶活性的方法。其適用于各種細胞裂解萃取液樣品（動物、人體）、線粒體蛋白樣品、部分或完全純化酶樣品中SIRT3的活性定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。
技術背景
人體組蛋白脫乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家屬分成三類共20多個蛋白：種類I（class I）與酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于細胞核中；種類II（class II）與酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于細胞核和細胞漿里；上述兩大種類的蛋白分子催化結構域含有鋅，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。種類III（class III）為NAD+輔助因子必需，又稱為sirtuins，與酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，是進化保留的古老的酶類，存在于真核生物、古生菌（Archaea）和真細菌（Eubacteria）等，包括SIRT1至7等，為曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感型賴氨酸脫乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。催化賴氨酸脫乙酰基反應，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基團轉化產生的煙酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。其中可溶性SIRT3位于細胞線粒體內，體內熱量限制（caloric restriction）、寒冷刺激、細胞應激等因素，使成熟且活性Sirt3由細胞核轉移到線粒體，經基質加工肽酶（matrix-processing peptidase）激活，表達增加，作用于乙酰輔酶A合酶2（acetyl CoA synthetase 2）、UCP1、PGC-1α等天然目標底物，脫乙酰化和激活。其功能在于調節適應性生熱反應（thermogenesis）、確保能量產生、提供乙酸的代謝使用、調節基礎ATP水平、調節影響線粒體通透性的凋亡信號、調節表觀遺傳基因沉默，是代謝或氧化狀態的感應因子，生命延長（life extension）的標志。Sirt3異常，將導致神經退行性疾病、癌癥、衰老、代謝功能異常等疾病。基于人工合成的乙酰化p53多肽底物Ac- Gln-Pro -Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切離的功能，首先使用熒光染料氨甲基香豆素（aminomethylcoumarin；AMC）來標記乙酰化p53多肽底物，其次進行脫乙酰化，最后底物進一步在氨基肽酶的催化酶解，釋放出具有強烈熒光的7-氨-4甲基香豆素（7-amino-4-methylcoumarin；AMC）（激發波長350-360nm；散發波長450-465nm），由此來定量測定沉默調節蛋白3的活性。其反應系統為：
Sirt3
Ac-Gln-Pro-Lys-Lys（Ac）-AMC + NAD → Ac- Gln-Pro -Lys-Lys-AMC + nicotinamide + O-acetyl-ADP-ribose
氨基肽酶
Ac-Arg-His-Lys-Lys-AMC → Ac-Arg—His-Lys-Lys + AMC
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