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組織Akt/PKB激酶總活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)
產(chǎn)品編號(hào) HPBIO-JM6211
中文名稱: 組織Akt/PKB激酶總活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)
英文名稱:
本公司所有產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室科學(xué)研究使用,不得用于醫(yī)療診斷,食品,化妝品和其他用途。
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HEPENGBIO組織Akt/PKB激酶活性光度法定量檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品說(shuō)明書
主要用途
HEPENGBIO組織Akt/PKB激酶活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)多肽底物,在敏感性抑制劑存在與否的情況下,受到Akt1/PKBα磷酸化后,進(jìn)而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng),測(cè)定產(chǎn)生ADP過(guò)程中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的氧化反應(yīng), 即采用光度法測(cè)定其氧化后峰值的變化,以分析組織裂解樣品中Akt/PKB活性的方法。其適用于各種組織裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中Akt/PKB激酶的定量檢測(cè),以及抑制劑和激活劑的篩選。
技術(shù)背景 
蛋白激酶B(protein kinase B;PKB),又稱為v-akt鼠源胸腺瘤病毒腫瘤基因同源體(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog;Akt),是高度同源的PKB/AKT家屬(PKBα/Akt1、PKBβ/Akt2、PKBγ/Akt3)中的一員,屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶(serine/threonine protein kinase;EC2.7.11.1)家族的成員,是哺乳動(dòng)物細(xì)胞信號(hào)的重要分子之一。Akt/PKB分為3個(gè)高度同源的亞型:PKBα/Akt1、PKBβ/Akt2、PKBγ/Akt3。PKBα/Akt1與細(xì)胞存活通路、蛋白合成通路有關(guān),通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡,幫助細(xì)胞存活,由此導(dǎo)致組織生長(zhǎng),尤其是骨骼肌肥大,甚至癌癥發(fā)生;PKBβ/Akt2與胰島素代謝通路有關(guān),誘導(dǎo)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn);PKBγ/Akt3主要在腦組織中表達(dá),與腦組織生長(zhǎng)有關(guān)。作為一種生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)蛋白激酶,其含有普列克底物蛋白(pleckstrin)同源的結(jié)構(gòu)域,與磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-OH kinase;PI3K)產(chǎn)物結(jié)合,使PKBα/Akt1轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜上,受到肌醇磷脂依賴性激酶1(phosphoinoside-dependent kinase 1;PDK1)的磷酸化而激活,達(dá)到調(diào)控細(xì)胞繁殖、細(xì)胞周期、糖原合成、血管生成等作用。PKB/Akt成為癌癥治療的藥物靶標(biāo)。其磷酸化目標(biāo)序列為RPRAATF。基于底物RPRAATF,在ATP的參與下,受到Akt/PKB激酶的磷酸化,獲得產(chǎn)物磷酸化多肽,進(jìn)而通過(guò)丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase;LDH)反應(yīng)系統(tǒng)中,還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其吸光峰值的變化(340nm),來(lái)定量分析Akt/PKB激酶的總活性。其反應(yīng)方式為:
Akt/PKB
RPRAATF  +  ATP  →  RPRAApTF  +  ADP
 
pyruvate kinase
Phosphoenolpyruvate  +  ADP       →      pyruvate  +  ATP
         
lactate dehydrogenase
pyruvate  +  NADH       →      lactate  +  NAD+
           (高吸收峰) (低吸收峰) 
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO清理液(Reagent A)        60毫升
HEPENGBIO裂解液(Reagent B)        10毫升
HEPENGBIO緩沖液(Reagent C)    4毫升
HEPENGBIO酶促液(Reagent D)  500微升
HEPENGBIO反應(yīng)液(Reagent E)  500微升
HEPENGBIO底物液(Reagent F)       500微升
HEPENGBIO陰性液(Reagent G)  500微升
產(chǎn)品說(shuō)明書       1份
保存方式 
保存HEPENGBIO清理液(Reagent A)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,嚴(yán)格避免光照和反復(fù)凍融;有效保證6月
用戶自備 
Akt/PKB激酶:用于抑制劑篩選
1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器
15毫升錐形離心管:用于樣品處理的容器
(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于細(xì)胞預(yù)處理
200微升1厘米光徑比色皿或96孔板:用于光度分析操作的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于樣品光度分析

 
檢測(cè)報(bào)告(COA)
使用說(shuō)明
MSDS查詢
使用說(shuō)明
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